细胞毒性实验测ic50(细胞毒性实验为啥用L929)

丁香实验

细胞实验优点太多了:造模快速、玩转机制、周期超短。

如果你是高校基础医学部的同学,或者身在临床想突破高分文章的临床医生,不妨试试细胞实验,10 分 SCI 也能拿下,比如下面这两篇:

吃透细胞凋亡,发表 11 分文章

细胞毒性实验测ic50(细胞毒性实验为啥用L929)

这篇发表在 Genes & Development 期刊的论文,来自施一公团队,用最基础的细胞凋亡机制研究,收获 IF 11 的高分。

玩转明星分子,细胞验证功能

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另一篇发表在 Nucleic Acids Res 杂志上的论文是天津医科大学肿瘤研究所的研究结果。主要做两个分子之间的调控模式,进一步从动物和细胞水平研究功能,该期刊影响因子已达到 17 分。

看到这里很多同学不理解「为什么我的细胞实验只能发 2 分?」「究竟怎样做细胞实验,才能发挥出更大潜力?」

在了解细胞实验的「全部玩法」后,再查看文献中「常用科研思路」参考复用,你也可以用细胞达到 SCI 高产!

为了帮助科研新手突破第一步——了解细胞实验的全部玩法,发挥科研想象力。丁香实验整理了细胞培养专题和常用细胞实验专题。内含保姆级实验 protocol、视频指导以及常见问答。

想要玩转细胞实验

建议订阅收藏细胞专题

专题内容持续更新中

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一起看看专题页内,有哪些内容吧!

如何养出稳定细胞?

想要养出可爱皮实又稳定的细胞,总共分几步?丁香实验给大家共同整理了一份「细胞培养大全教程」,让大家快速掌握细胞培养技术要点。

点击下方紫色小标题,即可查看完整实验讲解。

01、唤醒你的细胞

大多数实验使用细胞系,因此正确操作细胞复苏很重要,细胞复苏的基本原则是快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。

02、壮大细胞团队

贴壁细胞的换液、传代,都是细胞培养中的基础操作,需要严格遵守无菌原则,且严谨地在细胞培养皿上标记出操作人、操作时间,细胞系名称等信息。

03、冻存多余细胞

细胞生长至对数中晚期后,用培养基制备高浓度细胞悬液,加入细胞保护剂,等份转移至冻存管中做好细胞冻存保种,细胞冻存原则是慢冻,保证后续实验可以顺利进行。

9 个实验务必掌握

搞定细胞培养后,第二件事就是——做「正经」实验了。

以下都是常用的细胞入门级实验,了解其中原理和背后应用,方便拓展科研思路,做实验时有更多选择,现已收录在丁香实验「细胞常用实验专题」内。

点击下方紫色小标题,即可查看完整实验讲解。

>>> 细胞划痕实验

细胞划痕 (wound healing)法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,类似实验还有 Transwell ,两类实验方法优缺点如下:

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>>> 细胞毒性分析

细胞毒性是指由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。常用细胞毒性检测方法有 CCK-8 法、MTT 法等。

>>> 细胞增殖分析

同样,CCK-8、MTT 也可用于简便而准确的细胞增殖分析,以下是两种试剂利弊分析:

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>>> 细胞 RNA 提取实验

细胞 RNA 的提取是很常用的实验方法,可以用来做细胞 Real-Time PCR、分子克隆、Northern-Blot、RNA 体外转录与翻译等实验。

通过加入Trizol,能破坏细胞和溶解细胞成分,利用氯仿的萃取得到上层水相(含 RNA )、界面层和下层的红色有机相(含 DNA 和蛋白)。得到的水层用异丙醇沉淀并经过酒精的洗涤去除杂质,就能分离大小不一的各种 RNA。

>>> 细胞蛋白质提取实验

细胞蛋白的提取是生物学实验中一种常见的实验方法,是很多其他实验如 western blot 的前提。

通过加入裂解缓冲溶液以及相应的蛋白酶抑制剂,能较好的保持细胞内生物大分子的天然状态,在透膜剂以及超声破碎仪的辅助下,细胞发生破裂,内容物释放,分离出蛋白质。

>>> 细胞 ROS 实验

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)是超氧自由基过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等总称。

它参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程,与多种神经退行性疾病相关,如阿尔兹海默症、帕金森症等,通过检测 ROS 水平,可以评估疾病模型是否建立成功,亦可作为药效评价指标。

>>> 细胞免疫化学 & 细胞免疫荧光

免疫细胞化学与免疫细胞荧光两者实现的实验目的相似,可以从形态角度检测特定蛋白含量变化,但各有优缺点,具体如下:

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>>> 细胞免疫蛋白共沉淀

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。

类似方法还有 GST-pulldown,各有优缺点,具体如下:

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>>> 细胞转染和分析(稳转;瞬转)

细胞转染是指将外源分子如 DNA RNA 等导入真核细胞的技术。可以分为瞬时转染和稳定转染,两种方法的优缺点比较如下:

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在以上内容全都掌握了以后,成熟运用,就能做出你想要的研究。

最后,除了基础方法以外,科研思路也很重要,推荐一些期刊,大家在练技术的同时也可以学习学习「套路」:

  • Cell Death & Disease:覆盖肿瘤、干细胞、细胞死亡领域,审稿周期 2 个月,IF=6.28
  • Journal of Cellular and Molecular Medicine:覆盖肿瘤、心血管、基础医学领域,审稿周期 3 个月,IF=4.829
  • Cell Reports,综合期刊,覆盖医学、药学领域,审稿周期 1.9 个月,IF=8.695

............试读结束............

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